Caracterización de una vacuna profiláctica contra cáncer asociado a HPV16, basada en el direccionamiento de E5 a células dendríticas / Brenda Quiroz Medina

Tesis (Maestría en Ciencias con área de concentración en Enfermedades Infecciosas) -- Escuela de Salud Pública de México. INSP, 2023

El Cáncer de Cuello uterino (CaCu) es el cuarto tipo de cáncer más común en mujeres a nivel mundial, y el tercer lugar en mortalidad en México. La infección por el virus del papiloma humano (HPV) es el principal factor etiológico asociado al desarrollo de cáncer, siendo los genotipos más prevalentes el 16 y 18. Durante la infección con HPV la oncoproteína E5 bloquea la presentación de antígenos virales al inhibir la acidificación de los endosomas, evitando así la presentación de antígenos por MHC-II, así como el transporte de MHC-I y TAPs, resultando en una respuesta inmune deficiente. Recientemente, se ha propuesto que el direccionamiento de antígenos a células dendríticas (CDs) como células presentadoras de antígenos profesionales estimulan la respuesta inmune específica. El direccionado de antígenos a CDs a través de un anticuerpo generado contra el receptor DEC-205, ha permitido la activación de células T, sentando las bases para nuevas vacunas terapéuticas. Un estudio previo en nuestro laboratorio mostró que la respuesta inmune de E5 direccionado a DEC-205 por vacunación terapéutica en un modelo tumoral murino para HPV16, generó una fuerte respuesta inmune protectora, originando por la presencia de células T CD4+ y CD8+ de memoria, con un perfil celular Th1/Th17. Este modelo permitió mantener libre de tumor al 70% de los ratones por 70 días e incremento la sobrevida en un 75% a los100 días. Sin embargo, 30% de ratones tratados con el conjugado 205:E5 desarrollan tumores. Dado que E5 se expresa tempranamente en lesiones premalignas y que puede ser dirigido a CDs se planteó el siguiente: Objetivo: Caracterizar el efecto de la vacunación profiláctica de E5 al ser direccionada a células dendríticas en el modelo tumoral murino Balb/c para HPV16. Metodología. Por reacción química se generó el conjugado
205:E5, se purificó y se analizó para evaluar su actividad por Western blot. El conjugado de HPV16-E5 fue inoculado de forma profiláctica en grupos de 5 murinos hembras BALB/c de 6-8 semanas al día 0 y 7. Posteriormente, los retados con la línea celular BMK-16-myc (contiene el genoma de HPV16) a los 14 días post-inoculación. Se monitoreo el crecimiento tumoral en los murinos y sacrificados al llegar a 500-700 mm3 y seguidos hasta el día 66, se evaluó la
contra Resultados. Se establecieron las condiciones para generar el entrecruzado de 205:E5 y obtener el mejor rendimiento el cual fue de 50% de E5 en el entrecruzado. Se determinó que el conjugado anti-DEC-205:E5 es funcional dado que fue capaz de reconocer el receptor DEC-205 en lisado de CDs por Blot. Desafortunadamente, la vacunación con anti-DEC-205:E5 no fue lo esperado, ya que crecimiento tumoral fue del 100% en estos ratones y el porcentaje de sobrevida fue tan solo del 20% al día 60. Al revisar los títulos de anticuerpos anti-E5 en los ratones vacunados con anti-DEC-205:E5, los niveles de anticuerpos fueron negativos. Se logró generar un entrecruzado con un alto rendimiento (50%) y funcional ya que reconoce al receptor DEC-205 en CDs. Sin embargo, la presencia de tumores en el 100% de los ratones, la baja supervivencia (20% al día 60) y la ausencia de anticuerpos anti-E5 en los ratones vacunados con anti-DEC.205:E5 sugiere que el complejo estaba desactivado o degradado, lo que evito la respuesta antitumoral e incrementar la supervivencia de los murinos con la vacuna profiláctica.
Palabras clave: HPV16-E5, células dendríticas, vacunas, respuesta inmune, entrecruzado, modelo tumoral .