Análisis funcional del restablecimiento de la actividad del gen reck por silenciamiento de mlR-21 en líneas celulares de cáncer cérvico uterino transformadas con VPH / Seidy Yudith Aguilar Martínez

Tesis (Maestría en Ciencias con área de concentración en Enfermedades Infecciosas) -- Escuela de Salud Pública de México. INSP, 2022

Introducción: La infección por genotipos de virus del papiloma humano de alto riesgo oncogénico (VPH-AR) está asociada con el desarrollo de cáncer cérvico uterino (CaCU). Como en otras neoplasias, en CaCU la expresión de microRNAs (miRNAs) está alterada. Los miRNAs son reguladores post-transcripcionales de la expresión génica e influyen en el desarrollo y progresión de cáncer. miR-21 está sobre-expresado en células tumorales y regula negativamente la expresión de genes supresores de tumor. La sobre-expresión de miR-21 se relaciona con la sub-expresión del inhibidor de metaloproteasas, RECK, y con la capacidad de las células tumorales de degradar matriz extracelular (MEC). Debido a que se desconocen las implicaciones funcionales de la regulación de RECK por miR-21 en CaCU, el objetivo del presente proyecto fue analizar los cambios en la migración celular que dirige RECK cuando su expresión se reestablece a consecuencia del silenciamiento de miR-21, en líneas celulares de CaCU. Metodología: Se evaluó la funcionalidad de los elementos de respuesta para microRNAs (MREs) en el transcrito del gen RECK para miR-21 utilizando plásmidos reporteros. Se analizó el cambio en la expresión de RECK posterior al silenciamiento de miR-21 a través de ensayos de RT-qPCR. El restablecimiento de la actividad de RECK por silenciamiento de miR-21, se determinó mediante la evaluación de la migración de células de CaCU por ensayos de cierre de herida. Resultados: Se determinó la co-relación negativa entre la sobreexpresión de miR-21 y la disminución de RECK mediante los MREs propuestos. Se observó un cambio en la expresión de RECK posterior al silenciamiento de miR-21 en distintos intervalos de tiempo. Se observó un cambio en la migración celular posterior al silenciamiento de miR-21 en los intervalos de 12 h y 24 h. Conclusiones: Se confirmó a RECK como un blanco de miR-21 en una línea celular de CaCU transformada con VPH a través de MREs. El análisis de la expresión relativa de RECK posterior al silenciamiento de miR-21 permitió observar un aumento en el transcrito de RECK posterior al silenciamiento de miR-21. El silenciamiento de miR-21 disminuyó la migración de las células tumorales en comparación con la migración que presentan las células tumorales sin tratamiento.
Palabras clave: VPH, miR-21, RECK, invasión, migración, metaloproteasas.